大鼠褪黑素（MT）定量检测试剂盒（ELISA）专为科研职责者设想，用于定量检测血清、血浆、细胞培养上清液及组织中的大鼠褪黑素（MT）含量。在使用本试剂盒前，请务必仔细研读本诠释书。

施行旨趣

本试剂盒弃取竞争 ELISA 法。事前包被褪黑素（MT）抗体的微孔板中，纪律加入样本 / 校准品和 Asaay Diluent，温育洗涤后，加入 SA - HRP 再次温育。经二次洗涤，加入底物 TMB 显色，室温响应后用隔断液隔断，通过读取 OD 值完结检测。OD 值与样品中褪黑素（MT）含量呈负关系。该试剂盒具备灵巧度高、特异性强、疏导性好、操作便捷快速等上风，对血清中褪黑素（MT）含量的变化具备可靠的检出能力。

试剂盒截止 本试剂盒仅用于科研，严禁用于临床会诊。 请在试剂盒标示的有用期内使用，逾期居品切勿使用。 请勿与其他厂家的试剂盒或组分混用。 若样品需稀释，可使用 PBS（PH7.4）。 若样本值高于最高模范品浓度，需顺应稀释后重新测定。 检测前需摈弃待测样本中可能存在的异嗜抗体对检测成果的搅扰。 本试剂盒测定成果与通过其他措施取得的成果不具有径直可比性。 张开剩余79%时间辅导 羼杂卵白溶液时，注目幸免起泡。 加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本齐要更换移液枪头，大众组分悬臂加样，驻扎交叉羞辱。 确保合适的温育时候和充分的洗涤门径，以保证施行成果的准确性。 使用自动洗板机时，加入 30 秒浸泡门径可提升检测精度。 底物溶液应为无色液体，若保存进程中变为蓝色，标明已失效，不能使用。 隔断液加样划定与底物溶液一致，加入后蓝色底物产物会短暂变为黄色。 施行用剩的板条，应立即放回自命袋密封，低温干燥保存。 通盘液体组分使用前需充分摇匀，严格按诠释书的时候、加样量及划定进行温育操作。 试剂盒组分与保存

未开封的试剂盒应保存在 2 - 8℃，逾期试剂盒阻截使用。其组分包括：

校准品：0.5ml / 管 * 6 管，由抗原配制的 6 个浓度模范品，浓度纪律为 80、40、20、10、5、0pg/mL。 包被微孔板：有 96T/48T 规格，预包被固相抗体。 SA - HRP：12mL，为 HRP 标记物。 Asaay Diluent：12mL，用于分歧 MT 与衔接卵白。 TMB：12mL，TMB 职责液。 隔断液：12mL，2mol/L 稀释液。 20× 浓缩洗涤液：30mL，含 0.15% Tween20 的 PBS。 诠释书：1 份。 自命袋：1 个。 不干胶：2 片。 其他用品

施行需准备酶标仪（450nm）、精密移液器及一次性吸头、蒸馏水、洗瓶未必自动洗板机、37℃水浴锅或恒温箱、500ml 量筒。

生物安全 检测需允洽施行室料理表率，严格驻扎交叉羞辱，通盘样品、洗弃液和放置物齐应按传染物惩办。 试剂盒液体组分含 proclin - 300 防腐剂，可能引起皮肤过敏，幸免吸入烟雾与皮肤斗争。 底物液对皮肤、眼睛和上呼吸谈有刺激，幸免吸入烟雾。 施行时应戴上防护手套，完成后澈底洗手。 样品的汇集和储存 细胞培养上清：4000rpm 离心 20min，去除细胞颗粒和团聚物，上清液保存于 - 20℃以下，幸免反复冻融。 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作幸免细胞刺激，4000rpm 离心 20min 分歧血清，保存于 - 20℃以下，幸免反复冻融。 血浆：用肝素、EDTA 或柠檬酸钠抗凝，4000rpm 离心 20 分钟取上清，保存于 - 20℃以下，幸免反复冻融。 组织：用预冷的 PBS (0.01 M,pH = 7.4) 冲洗组织，去残留血液，称重剪碎。按 1 : 9（可更始）体积比与 PBS（含卵白酶扼制剂）在冰上研磨，可超声幻灭或反复冻融，5000×g 离心 5 - 10 分钟取上清检测。

样本在 2 - 8℃可储存 72h，或在 - 20℃储存 6 个月。若样本网罗后未一次检测完，需按一次用量分装冻存，幸免反复冻融，使用时室温解冻并确保均匀充分。

历练措施操作标准 将试剂移至室温均衡两小时，按当批检测数目，用蒸馏水 1：20 稀释浓缩洗涤液，混匀备用。 取出预包被板，设空缺对照孔（不加液体），每个校准品设 2 孔，每孔加对应校准品 15μl，其余检测孔加待测血清或质控品 15μl。 除空缺孔外，通盘孔加 Asaay Diluent 100μl，混匀，贴封板膜，37℃温育 60 分钟。 洗板： 手工洗板：弃去孔内液体，注满洗涤液，静置 10 秒甩干，疏导 3 次后拍干。 洗板机洗板：弃取洗涤 3 次标准洗板后拍干。 每孔加 SA - HRP 100μl（空缺对照孔之外），混匀，贴封板膜，37℃温育 30 分钟。 疏导第 4 步洗板操作。 每孔加 TMB 100μl，飘荡混匀，37℃避显豁色 15 分钟，每孔加隔断液 100μl。用酶标仪在 450nm 波长下，先以空缺对照孔调零点，再测定各孔光密度值（OD 值）。 手工洗板：弃去孔内液体，注满洗涤液，静置 10 秒甩干，疏导 3 次后拍干。 洗板机洗板：弃取洗涤 3 次标准洗板后拍干。 成果盘算推算

检测完成后，以模范品浓度为纵坐标云开体育，对应的吸光度（OD 值）为横坐标，愚弄盘算推算机软件弃取四参数 Logistic 弧线拟合（4 - pl）创建模范弧线方程。通过样本的吸光度（OD 值），愚弄方程盘算推算样品浓度值。若样品被稀释，测得的浓度值需乘以稀释倍数，即为样品最终浓度。

试剂盒性能谋略 物感性能：液体组分应领略，无千里淀或絮状物，通盘组分包装无破碎，各组分装量不少于条件。 剂量响应弧线线性：用四参数 Logistic 弧线拟合（4 - pl），剂量 - 响应弧线关系悉数（r）的填塞值不低于 0.9900。 精密度： 批内精密度：三组高、中、低浓度样品在吞并板块内进行二十次精度评估，批内变异悉数 CV% 小于 15%。 批间精密度：三组高、中、低浓度样品在不同板块内进行二十次精度评估，批间变异悉数 CV% 小于 15%。 灵巧度：最低检出限不高于 0.1pg/mL。 回收率：三组高、中、低浓度样品在吞并板块内进行五次回收率评估，回收率在 85% - 115% 之间。 褂讪性：2℃ - 8℃保存，有用期 6 个月。 检测范畴：5 pg/mL – 80 pg/mL 。 批内精密度：三组高、中、低浓度样品在吞并板块内进行二十次精度评估，批内变异悉数 CV% 小于 15%。 批间精密度：三组高、中、低浓度样品在不同板块内进行二十次精度评估，批间变异悉数 CV% 小于 15%。 发布于：湖北省